Эффективность дезинфицирующих средств в отношении биоплёночных форм клинических штаммов энтеробактерий

Множественная резистентность госпитальной флоры к антибактериальным препаратам, в том числе к антисептикам и дезинфектантам, обусловлена преимущественным существованием микрофлоры в виде биоплёночных сообществ и микробных консорциумов, способных колонизировать организм пациента, а также различные поверхности, в том числе медицинское оборудование [1].

Цель исследования — оценка способности дезинфицирующих средств разрушать биополимерный матрикс и вызывать гибель биоплёночных форм клинических штаммов энтеробактерий.

Оценку эффективности дезинфицирующих средств в отношении биоплёночных форм 72 штаммов бактерий выполняли после формирования биоплёнок в лунках 24-луночных культуральных планшетов. После удаления из лунок бактериальной суспензии, промывания и высушивания вносили дезинфектант в рабочих концентрациях. По окончании экспозиции дезинфектант удаляли, в лунки вносили универсальный нейтрализатор на 10 мин, затем раствор ферментов с экспозицией 30 мин. В качестве контроля использовали планшет с испытываемыми биоплёночными культурами, который подвергали описанными выше воздействиям, за исключением дезинфектанта, вместо которого применяли стерильную водопроводную воду. Опытные и контрольный планшеты с лунками, заполненными растворами ферментов, подвергали воздействию ультразвука в ультразвуковой бане UM-4 (Unitra-Unima, Olsztyn, Польша; частота 25 кГц) на протяжении 10 мин при комнатной температуре. После завершения воздействия ультразвука содержимое лунок тщательно пипетировали и готовили разведения в физиологическом растворе: из опытных лунок — до 10^–4, из контрольных — до 10^–6. По 100 мкл каждого разведения высевали на поверхность ТСА в чашках Петри. Чашки с посевами инкубировали при температуре плюс 37°С в течение 18–24 ч, после чего учитывали результаты. Подсчитывали число колоний в посевах в опыте и контроле, определяли в составе биоплёнок КОЕ/мл бактерий, выживших после воздействия дезинфицирующего средства, сравнивали с контрольными значениями.

Биоплёночную культуру считали чувствительной, а дезинфицирующее средство в испытываемом режиме эффективным, если наблюдалась полная гибель бактерий в составе биоплёнки. Умеренную устойчивость культуры и недостаточную эффективность дезинфицирующего средства регистрировали при массивности роста культивируемых бактерий в составе биоплёнки на уровне 10¹–10² КОЕ/мл. Устойчивой считали биоплёночную культуру, а дезинфицирующее средство неэффективным при массивности роста выживших бактерий на уровне 10³КОЕ/мл и более.

Эффективность дезинфицирующих средств определяли с использованием четырёх препаратов с различными активными действующими веществами (АДВ): ЧАС + ПГМГ, ГА, этанол, ПГМГ + феноксиэтанол. Испытываемые режимы были наиболее жёсткими из рекомендуемых производителями для дезинфекции изделий медицинского назначения (ИМН).

Больничные штаммы энтеробактерий формировали биоплёнки с количеством живых бактерий в их составе 10⁷–10⁸ КОЕ/мл.

Уровень деконтаминирующей эффективности явно зависел от концентраций АДВ в рабочем растворе и экспозиции средства. В частности, дезинфицирующее средство на основе ЧАС + ПГМГ с содержанием в рабочем растворе ЧАС 0,097%, ПГМГ 0,001% при 60-минутной экспозиции было неэффективным в отношении 12,50 ± 7,63% культур и недостаточно эффективным в отношении 33,30 ± 10,88% культур. Высокоэффективное средство на основе ГА, концентрация АДВ которого в рабочем растворе составляет 2%, что признано достаточным для стерилизации ИМН при соответствующей экспозиции, по нашим данным, неэффективно для 50,00 ± 11,54% и недостаточно эффективно для 41,67 ± 11,38% биоплёночных культур. Вероятные причины — недостаточная экспозиция (3 мин) и, возможно, действие альдегида, фиксирующее биоплёночный матрикс. Дезинфицирующее средство на основе смеси ПГМГ с феноксиэтанолом с содержанием в рабочем растворе ПГМГ 0,5%, феноксиэтанола 2% при пятиминутной экспозиции оказалось недостаточно эффективным в отношении 50,00 ± 11,54% изученных культур. Этанол в концентрации 65% при трёхминутной экспозиции был недостаточно эффективным по отношению к 25,0 ± 10,0% и неэффективным — по отношению к 8,33 ± 6,38% изученных биоплёночных культур энтеробактерий.